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XTBG OpenIR  > 西双版纳热带植物园毕业生学位论文  > 学位论文

title: 不同内生真菌对药用石斛幼苗生长的效应
author: 孟 娉
Issued Date: 2017-5
Abstract: 兰科植物是典型的菌根植物,菌根真菌在兰科植物的生长与生命活动中具有重要的作用。石斛属(Dendrobium)为兰科植物第二大属,其中很多种是世界著名的药用植物,素有“中华仙草”的美称。近年来由于自然环境的破坏和过度采伐,使得石斛资源遭到严重破坏,对其开展保护刻不容缓。探讨石斛菌根真菌与其长势差异性的关系,筛选能有效促进石斛幼苗生长的菌根真菌,对石斛资源的保护与产业化都有重要的意义。本研究选取分布于西双版纳基诺乡龙帕古茶园及易武麻黑落水洞古茶园的齿瓣石斛(Dendrobium devonianum),生长于中国科学院西双版纳热带植物园兰园的兜唇石斛(Dendrobium aphyllum)、金钗石斛(Dendrobium nobile)与鼓槌石斛(Dendrobiun chrysotoxum)为研究材料,采集成年植株根断,利用单菌丝团分离法(Single Peleton Isolation Method)分离内生真菌,二代测序技术(Next Generation Sequencing Technology, NGS) 确定内生真菌分类地位,再利用真菌回接与无菌苗共生筛选出有效促生菌根真菌。另利用本研究组前期筛选获得的两株对齿瓣石斛无菌幼苗有促生作用的蜡壳菌属(Sebacina)真菌,探讨混合接种对齿瓣石斛无菌幼苗以及产业上铁皮石斛(Dendrobium officinale)幼苗生长的效应,同时选取分布于贵州省兴义市首草集团石灰山上的铁皮石斛幼苗为研究材料,初步探讨不同长势的幼苗根内内生真菌组成的差异性,主要结果如下:1、从齿瓣石斛根中分离获得2株内生真菌,菌株编号分别为FDdS-1与FDdS-10,从兜唇石斛根部分离获得2株内生真菌,菌株编号分别为FDaS-2 与FDaS-4,从金钗石斛根部分离获得5株内生真菌,菌株编号分别为FDnS-1、FDnS-2、FDnS-6、FDnS-7、FDnS-12,从鼓槌石斛根部分离获得2株内生真菌,菌株编号为FDcS-1、FDcS-2,经分子鉴定菌株FDdS-1、FDnS-2和FDnS-12与胶膜菌属(Tulasnalla)真菌相似度最高,菌株FDdS-10与小孔菌属(Microporus)真菌相似度最高,菌株FDaS-2、FDaS-4、FDnS-1、FDnS-6、FDnS-7、FDcS-1和FDcS-2与瘤菌根菌属(Epulorhiza)真菌相似度最高。
2、通过共生培养实验,发现FDdS-1菌株对齿瓣石斛无菌幼苗生长无显著作用,FDnS-1、FDnS-2与FDnS-6菌株对金钗石斛无菌幼苗生长表现出显著抑制作用,其余菌株均对其宿主无菌幼苗有致病致死效应。
3、选用已验证有促生效果的菌株FDdS-5、FDdS-9,验证混合接种对石斛幼苗生长的效应,结果显示: FDdS-5、FDdS-9及FDdS-5 + FDdS-9接种齿瓣石斛无菌幼苗,各实验组与不接菌对照组相比均表现出显著促生作用,且FDdS-9及FDdS-5 + FDdS-9实验组促生作用更为明显,但混合接种与单菌株接种相比均未表现出显著差异性。
4、选用FDdS-5与FDdS-9菌株探索其对铁皮石斛幼苗的促生效应,结果显示:1) FDdS-5、FDdS-9及FDdS-5:FDdS-9=1:1菌株接种勐海光明石斛基地已培值1年的大苗,显示各实验组与对照组相比均表现出显著促生作用,且混合菌株接种与单菌株接种相比在株高指标上表现出协同效应,在茎粗、鲜重及干重指标上表现出中间效应;2) FDdS-5、FDdS-9及FDdS-5:FDdS-9=1:1菌株接种勐海光明石斛基地已培值1个月的小苗,显示单菌株具有一定的促生作用,而混合菌株表现出了抑制作用;3) FDdS-5、FDdS-9及FDdS-5:FDdS-9=1:1菌株接种兴义首草石斛基地已培值1个月的小苗,显示单菌株有一定的抑制作用,而混合菌株与不接菌对照组相比未表现出显著差异性。
5、同一样方内取不同长势的铁皮石斛幼苗根部,利用单菌丝团挑取技术分离内生真菌并利用内转录间隔区 (Internal Transcribed Spacer, ITS)序列确定其分类地位,结果显示:两不同样方内长势较好的幼苗根内均分离获得3种内生真菌,样方1真菌组成为Verticillium、Sordariomycetes、Epulorhiza,样方2真菌组成为Sebacina、Tulasnella、Epulorhiza,长势较差的幼苗根内均分离获得2种内生真菌,组成均为Epulorhiza、Tulasnella,表明长势较好幼苗根内内生真菌种类多于长势较差幼苗根内内生真菌种类。
Degree Level: 硕士
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孟 娉. 不同内生真菌对药用石斛幼苗生长的效应[D]. 北京. 中国科学院大学. 2017.
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